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一、巨細胞病毒試劑盒用途及檢測方法簡述

巨細胞病毒(CMV)是一種皰疹病毒。是引起先天性變態(tài)反應性疾病和接受大量輸血及免疫抑制療法患者中并發(fā)癥的zui主要的生物學因子。約有一半的孕婦初期感染后就把此病傳給胎兒。當胎兒在子宮內感染后，可引起智力發(fā)育遲緩、致盲或致聾。

把純化了巨細胞病毒抗原包被在微孔表面。加入經稀釋的患者血清樣品。若其中存在CMV IgM抗體，它與包被的抗原結合成為抗原-抗體復合物，用水洗去未結合物后加入底物和顯色劑，所產生顏色的強度與樣品中的抗體的量成正比。其結果通過酶標儀在平行檢測中與臨界校正液和對照品相比較而得出。

二、巨細胞病毒試劑盒試劑盒的組成

1．抗原包被的微孔板：96孔，1塊

2．酶聯(lián)試劑：12mL，1瓶，(紅色液體)

3．樣品稀釋液：22mL，1瓶，(藍色液體)

4．陰性對照：150μL，1瓶，(無色蓋)

5．臨界校正液：150μL，1瓶，(黃色蓋)

    CMV IgM指數=1.0

6．陽性對照：150μL，l瓶，(紅色蓋)

7．洗滌濃縮液(20X)：50mL，1瓶

8，TMB試劑(一步)：11mL，1瓶

9．終止液 (1N HCL) ：11ml,，1瓶

三、巨細胞病毒試劑盒的保存和儀器

1．試劑盒在2-8℃下保存。

2．微孔板保存在有干燥劑的密封袋中。

3．試劑盒在有效期內是穩(wěn)定的。

4．試劑盒中的試劑在保存或使用期間，應避免暴露在熱、陽光和強烈光線之中。

*警示與注意

1．試劑盒的某些材料中可能含有潛在生物危險的組分，應按微生物學和生物醫(yī)學實驗室有關生物安全的規(guī)定進行操作和處理。

2．本劑盒僅適用于實驗室。

3．勿用嘴吸移液管；禁止在樣品和試劑盒試劑操作區(qū)吸煙、吃東西。

4．本試劑盒中的各組分是一個完整的單位，不同 批號的試劑盒中的組分不能混用。

5．本試劑盒試劑中含有防腐劑*。*會與鉛、銅形成爆炸性的金屬化合物。

   處理：用大量水沖洗。

四、巨細胞病毒試劑盒樣品的采集和制備

1．采集血樣并分離血清。

2．采集的樣品在2-8℃下可保存7天。冰凍狀態(tài)下可保存6個月。血清樣品要避免反復凍融。

五、巨細胞病毒試劑盒試劑的準備

1．使用前使全部樣品和試劑達到室溫(18-25℃，下同)。   

2．制備洗滌緩沖液：按1：19的比例稀釋洗滌濃縮液(20X)，即50mL洗滌濃縮液用蒸餾水或去離子水稀釋至l升。已稀釋的洗滌緩沖液在2-8℃下可穩(wěn)定一個月，用前混合好。

六、巨細胞病毒試劑盒檢測步驟

1．從酶標板上拆下所需數量的板條，并固定在支架上。

2．按1：40稀釋待測樣品、陰性對照、陽性對照和臨界校正液。方法是將5μL上述樣品分別加入到200μL樣品稀釋液中，充分混勻。

3．取100μL稀釋的血清樣品、臨界校正液或對照品加入到相應的微孔中。并取100μL樣品稀釋液加入到1A位置的微孔內，作為空白對照。輕拍微孔架，去除液體中的氣泡并充分混勻。37℃下溫育30分鐘。

4．把全部微孔中的液體清除干凈后，用稀釋的洗滌緩沖液沖洗5次。

5．向每個微孔中加入100μL酶聯(lián)試劑，輕輕混合10秒鐘，37℃溫育30分鐘。   

6．甩干每個微孔中的酶聯(lián)試劑，然后用稀釋的洗滌緩沖液沖洗5次。

7．向每個微孔中加入100μL TMB試劑，輕輕混合

10秒鐘后，37℃溫育15分鐘。

注意：如無酶標儀，可在第七步加入TMB試劑，37℃溫育15分鐘后，觀察顏色變化。對比患者樣品的顯色與臨界校正液的顯色深淺進行判斷。

8．向上述微孔中加入100μL終止液(1NHCL)終止反應，輕輕混合30秒鐘。此步對確保全部藍色*轉變?yōu)辄S色十分重要。

9．用酶標儀在450nm處于15分鐘內讀出每個微孔中液體的O.D.值